罗非鱼TRAP分子标记反应体系优化设计方案的比较

• 作者: 张宁 朱文彬 杨弘 苏胜彦 董在杰 袁新华 马庆男
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 罗非鱼 TRAP 正交设计 单因素试验 优化
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 28-34
• 页数: 7页
• 分类号: Q953+.3
• 字数: 4904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2013.01.005

摘要

靶位区域扩增多态性(target region amplification polymorphism,TRAP)是一种新型功能性分子标记,比较了L16 (45)正交试验和单因素方法优化罗非鱼(Oreochromis spp.)TRAP反应体系.2种分析方法结果中dNTPs浓度、随机引物浓度、DNA浓度相同而镁离子(Mg2+)浓度和TaqDNA聚合酶浓度不同,不同因素间存在一定的交互作用.正交设计方法比单因素法更简单、科学、合理.该试验获得罗非鱼15 μL TRAP最优反应体系为DNA模板浓度为60 ng、Mg2+浓度为1.5 mmol·L-1、dNTPs浓度为0.3 mmol·L-1、TaqDNA聚合酶0.5U、随机引物浓度为7 pmol·L-1和固定引物浓度为10 pmol·L-1.该反应体系在4个罗非鱼群体中验证,表现出良好的稳定性和重复性,该反应体系的建立为TRAP标记应用于罗非鱼遗传多样性评价、种质鉴定、分子标记辅助育种等研究提供了新的手段.