神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用

• 作者: 傅德智 张亚妮 张振韬 施青青 李伟 李碧春 王丹 郑蒙蒙 陈昊
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: NA Mx 双基因表达载体 抗病毒活性 抗NDV
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 78-86
• 页数: 9页
• 分类号: Q784
• 字数: 5985字
• 语种: 中文

摘要

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果.克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA；分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性.用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达.随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果.结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH 3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达.联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72 h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48 h内亦未受到NDV的侵染；与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P＜0.05).构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因.