摘要:
背景:人脐带间充质干细胞作为新的种子细胞来源,如何迅速提高其增殖以满足临床所需的数量和质量,是迫切需要解决的现实问题.目的:探讨不同的灌注启动时间、灌注频率和灌注体积对人脐带间充质干细胞扩增和代谢的影响,建立高密度培养的半连续灌注培养工艺.方法:培养传代人脐带间充质干细胞,以批培养方式为参照,半连续灌注培养分成3组.①灌注启动时间组:批培养24 h 和48 h,分别开始换液,每2 d 更换75%.②灌注频率组:批培养48 h 开始换液,频率分别为每1,2,3 d,换液体积比为75%.③灌注体积组:批培养48 h 开始换液,频率为每2 d,换液体积比分别为25%,50%,75%,100%.结果与结论:相对于其他培养条件,灌注启动时间为48 h、频率为每天、体积比为75%的静态培养条件下,稀释率较大,细胞密度较大,葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率较高,谷氨酰胺比消耗速率较低,氨比生成速率较高,乳酸对葡萄糖的代谢系数较低,谷氨酰胺的代谢系数较高.这表明稀释率大,不仅葡萄糖和谷氨酰胺充足,而且细胞所需的微量元素和未知的因子也充足,满足了细胞生长的要求;同时排除乳酸和氨等对细胞的影响,去除条件培养基中某些因子对细胞的交互影响,提高了细胞的增殖.