RNAi技术体外沉默肌肉环指蛋白1的研究

• 作者: 丁洁 冯勇 朱志祥 梁炳生 贾英伟 达志峰 韦建
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 成肌细胞 L6 MuRF-1 质粒转染 RNA 干扰
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 78-82
• 页数: 5页
• 字数: 3598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/j.issn.2095-1221.2013.02.005

摘要

目的 探讨RNAi 技术体外抑制大鼠肌肉环状指蛋白1(MuRF-1)基因表达的效果,筛选出针对MuRF-1 基因最有效的siRNA 重组质粒.方法 根据大鼠MuRF-1 基因的mRNA 序列,设计4 组干扰序列,即siRNA MuRF1- Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,利用lipofactamine2000 转染试剂将siRNA 重组质粒转染大鼠成肌细胞系L6,于转染后48 h 与72 h,采用实时定量PCR 和Western blot 或免疫印迹检测其对MuRF-1 表达的抑制效果.MuRFl 基因siRNA 重组质粒瞬时转染后mRNA 和蛋白质数据以x ± s 表示.对照组与四组实验组的比较用单因素方差分析;多个样本均数的两两比较用LSD 检验.结果 ( 1)实时定量PCR 显示四组干扰质粒MuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对基因MuRF-1 的mRNA 的抑制率在转染后48 h 分别为67 ﹪、31 ﹪、11 ﹪,20 ﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F = 4.527,P = 0.024);72 h 分别为79 ﹪、59 ﹪、50 ﹪和61 ﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F = 19.088,P < 0.001),与48 h 相比,抑制效应更为明显,但以siRNA MuRF1- Ⅰ的抑制效果最为明显(t = 8.201,P <0.001).(2)使用Western 印迹灰度分析显示四组干扰序列对基因MuRF-1 的蛋白的抑制率在转染后48 h 分别为61 ﹪、40 ﹪、9 ﹪和15 ﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F= 4.286,P = 0.028);72 h 分别为70 ﹪、54 ﹪、30 ﹪和46 ﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F = 3.731,P = 0.042);与48 h 相比,MuRFl-Ⅰ、MuRFl-Ⅱ抑制效应与对照组相比有显著性差异(tⅠ = 3.256,P = 0.009;t Ⅱ = 2.512,P = 0.03),但MuRFl- Ⅲ和MuRFl- Ⅳ与对照组相比仍无显著性差异(P > 0.05).四对序列中,以siRNA MuRF1- Ⅰ的抑制效果最为明显.蛋白水平的抑制效果与mRNA 水平基本一致.结论 成功筛选出对MuRF-1 基因有效的siRNA 重组质粒,即siRNA MuRF1-Ⅰ,为通过RNAi 技术进一步研究其功能以及基因靶向治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁炳生	山西医科大学第二医院骨科	119	543	11.0	15.0
2	贾英伟	山西医科大学第二医院骨科	27	164	8.0	11.0
3	达志峰	山西医科大学第二医院骨科	6	25	3.0	5.0
4	朱志祥	山西医科大学第二医院骨科	5	22	2.0	4.0
5	丁洁	山西医科大学第二医院骨科	5	5	2.0	2.0
6	冯勇	上海市第六人民医院骨科	4	4	1.0	2.0
7	韦建	山西医科大学第二医院骨科	3	3	1.0	1.0