摘要:
目的 研究反义p38α MAPK(以下简称p38α)对缺氧及烧伤血清复合处理心肌细胞的作用. 方法 取30只成年SD大鼠制备烧伤血清(背部40% TBSAⅢ度烧伤).取80只SD大鼠的乳鼠分离、培养心肌细胞,按随机数字表法将细胞分为4组:正常对照组,心肌细胞未经任何处理,常规培养;烧伤血清+缺氧组,心肌细胞中加入体积分数10%烧伤大鼠血清后行缺氧培养;烧伤血清+缺氧+感染组,采用反义p38α转染的腺病毒感染心肌细胞,再加入体积分数10%烧伤大鼠血清后行缺氧培养;烧伤血清+缺氧+空载感染组,用空载腺病毒感染心肌细胞,再加入体积分数10%烧伤大鼠血清行缺氧培养.后3组于缺氧1、3、6、12h后,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹法检测各组心肌细胞p38α mRNA和蛋白表达,采用噻唑蓝法检测细胞活力,检测乳酸脱氢酶(LDH)含量;于缺氧1、6、12h后,采用膜联蛋白V单染法检测心肌细胞凋亡率.正常对照组行同上检测.每组各时相点设3个复孔.对数据进行单因素方差分析及LSD-t检验. 结果 (1)缺氧1、3、6h,烧伤血清+缺氧组p38α mRNA表达水平与正常对照组和烧伤血清+缺氧+感染组比较均升高,且差异有统计学意义(t值为2.725 ~4.375,P值均小于0.05).(2)缺氧1、3、6h,烧伤血清+缺氧组p38α蛋白表达水平与正常对照组和烧伤血清+缺氧+感染组比较均显著升高(t值为5.351~7.981,P值均小于0.01).(3)缺氧3、6、12h,烧伤血清+缺氧组心肌细胞活力分别为0.115±0.007、0.104 ±0.006、0.094±0.005,与正常对照组的0.141 ±0.014和烧伤血清+缺氧+感染组的0.136±0.009、0.124±0.010、0.112±0.007比较均降低,且差异有统计学意义(t值为2.357 ~6.812,P值均小于0.05).(4)缺氧后各时相点,烧伤血清+缺氧组LDH含量与正常对照组和烧伤血清+缺氧+感染组比较均显著升高(t值为22.753~ 201.273,P值均小于0.01).(5)缺氧1、6、12 h,烧伤血清+缺氧组心肌细胞凋亡率分别为(5.4±0.7)%、(8.7±1.1)%、(13.6±1.7)%,与正常对照组的(3.1±0.3)%和烧伤血清+缺氧+感染组的(4.3±0.5)%、(5.1±0.7)%、(7.2±0.9)%比较均升高(t值为2.345 ~9.700,P<0.05或P<0.01). 结论 反义p38α对烧伤血清+缺氧损伤条件下心肌细胞具有保护作用.