人高密度脂蛋白受体基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响

• 作者: 司书毅 姜华军 杜郁 杨帆 洪斌 王丽 贾晓健
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 关键词: 抗原,CD36 RNA加工,转录后 荧光素酶类 半衰期
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-35
• 页数: 7页
• 字数: 5145字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.01.007

摘要

目的 考察人高密度脂蛋白受体SR-BI基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响.方法 以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增获得SR-BI基因mRNA 3'UTR全长序列,克隆至荧光素酶报告基因的下游,分别构建重组质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR.利用脂质体转染HepG2细胞,进而检测转染后细胞的荧光素酶活性、荧光素酶报告基因mRNA的表达水平以及荧光素酶报告基因mRNA的半衰期.结果 通过PCR成功扩增获得人SR-BI基因3'UTR全长序列,分别构建重组荧光素酶报告质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR,并以pGL3-CLAp-luc-3'UTR转染HepG2细胞建立稳定转染细胞株CLAp-luc-3'UTRHepG2.通过荧光素酶活性检测、实时荧光定量RT-PCR以及mRNA半衰期检测,结果证实SR-BI基因的3'UTR的存在可显著降低荧光素酶活性及其mRNA水平,mRNA半衰期也显著缩短.结论 SR-BI基因3'UTR对其mRNA的稳定性有显著的影响,是SR-BI基因转录后水平调控的关键,为SR-BI基因表达调控提供了一个新机制.