一种改进后的重叠延伸PCR法对被孢霉重组载体的构建

• 作者: 孟祥亮 李培光 李洋 牛丽华 王宁新 黄大卫
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 逐次退火 重叠区域PCR 突变 拼接
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 62-67
• 语种: 中文

摘要

为了提高DNA大片段的拼接效率,通过引入逐次退火的PCR的方法,改良了传统的重叠延伸PCR方法.逐次退火PCR法,一方面延长了重叠区的PCR引物长度;另一方面把原来在1个循环中1个退火温度改成若干个,逐次降低退火温度,适用于Tm值相差比较大的引物;相邻的退火温度之间相差3-6℃.结果显示,通过此种方法成功拼接了ω3(2)和HCT两个大片段;PCR产物电泳条带单一,克隆测序证实序列完全正确,可以直接应用于后续试验.这种改进后的方法可以有效减少非特异性扩增,提高灵敏度,把这种方法称之为逐次退火重叠延伸PCR.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄大卫	山东农业大学植物保护学院	52	608	11.0	24.0
5	李洋	山东农业大学植物保护学院	7	13	2.0	3.0
6	李培光	山东农业大学植物保护学院	2	7	2.0	2.0
7	王宁新	山东农业大学植物保护学院	8	8	2.0	2.0
8	孟祥亮	山东农业大学植物保护学院	1	2	1.0	1.0
9	牛丽华	山东农业大学植物保护学院	1	2	1.0	1.0