二氯化钴化学缺氧诱导瘢痕成纤维细胞整合素连接激酶的表达及其对细胞增殖的影响

• 作者: 孙敬恩 李叶扬 李罡 林伟华 梁振文 汪锦伦 王晓红 米兰
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 缺氧 成纤维细胞 整合素连接激酶 增生性瘢痕
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 300-303
• 页数: 4页
• 字数: 3324字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2013.03.017

摘要

目的 探讨二氯化钴(CoCl2)化学缺氧对瘢痕Fb整合素连接激酶(ILK)表达的影响,以及其对细胞增殖的影响. 方法 体外培养7例患者增生性瘢痕Fb,取第5～6代细胞进行实验.7例患者的Fb各取6瓶,分别加入含6种终浓度为0、50、100、150、200、250 μmol/L CoCl2的DMEM培养液培养24 h,采用实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达.选择最适CoCl2浓度(100 μmol/L)进行缺氧刺激,观察ILK蛋白于CoCl2作用0、1、2、4、12、24 h的表达.将细胞分为正常对照组、阴性对照组、ILK小干扰RNA(siRNA)组,分别将con-siRNA及ILK siRNA转染入后2组细胞,对照组仅以培养液培养,24 h后弃培养液,置于含6种浓度CoCl2的培养液中培养24 h.各组各浓度4个复孔.采用3,3′-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠(XTT)法检测各组细胞增殖水平.对数据进行单因素方差分析以及重复测量方差分析,多重比较采用LSD法. 结果 100 μmol/L CoCl2作用24 h时ILK mRNA表达最高,与其他浓度CoCl2作用的Fb相比差异有统计学意义(F=50.958,P＜0.001).100 μmol/L CoCl2作用1h时Fb ILK蛋白表达量(0.243±0.009)较0 h(0.387±0.017)降低,2 h(0.361±0.010)开始增高,4h(0.584±0.028)、12 h(0.730±0.029)、24 h(0.785±0.031)ILK蛋白表达强度逐渐增强.其中1、4、12、24 h的ILK蛋白表达量与0h相比差异具有统计学意义(P值均小于0.05).XTT结果显示,正常对照组在100 μmol/L CoCl2作用时细胞增殖水平最高(F=488.026,P＜0.001),从150 μmol/L起细胞增殖水平开始下降,250 μmol/L时细胞增殖水平显著低于0 μmol/L时水平(P值均小于0.05).ILK siRNA组细胞增殖水平在各浓度CoCl2作用下无明显变化(F=2.542,P=0.056).ILK siRNA组的细胞增殖水平显著低于正常对照组及阴性对照组(F=2519.542,P＜0.001). 结论 ILK可能是Fb对缺氧应答的关键蛋白,轻度缺氧可以提高细胞ILK的表达,促进瘢痕Fb增殖；而重度缺氧可以降低ILK的表达,抑制细胞增殖.