SYBR Green I法洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系的建立

• 作者: 刘航 姚大彬 宇佳 李晓灿 迟德富 陈海一
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 洋虫 β-actin基因 荧光定量RT-PCR SYBR Green I
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 页码范围: 157-163
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4083字
• 语种: 中文

摘要

为了建立洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系，本实验采用MJ Research OpticonTM 2型实时荧光定量PCR仪，利用SYBR Green I染料法，根据GenBank上其他昆虫β-actin基因的保守序列设计引物，对PCR退火温度、引物浓度、模板浓度等各反应因子进行优化，结合扩增曲线和熔解曲线进行分析。结果显示，在20μL体系下，当2×SYBRR Premix Ex TaqTM为10μL时，引物和cDNA模板的最佳浓度分别为1μmol/L和50 ng/μL。最佳PCR反应程序为：94℃预变性30 s，44个循环包括94℃变性10 s，45℃退火30 s，72℃延伸40 s，最后加做熔解曲线82℃1 s。结果表明，在洋虫不同发育时期β-actin基因表达水平基本稳定，因此β-actin基因可以作为洋虫实时荧光定量RT-PCR的内参基因。本研究成功建立了2-ΔΔCT相对定量法的洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系，并分析了优化PCR反应体系的重要性，建立的洋虫β-actin基因荧光定量RT-PCR方法简便、特异性强，该体系的建立可用于洋虫蜕皮相关基因表达差异的深入研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	迟德富	东北林业大学生命科学学院	119	1045	13.0	26.0
2	刘航	东北林业大学生命科学学院	6	20	3.0	4.0
3	李晓灿	东北林业大学生命科学学院	35	209	9.0	12.0
4	宇佳	东北林业大学生命科学学院	45	231	9.0	12.0
5	陈海一	东北林业大学生命科学学院	2	16	2.0	2.0
6	姚大彬	东北林业大学生命科学学院	6	15	2.0	3.0