gcm蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 任恋 周英 唐超 张义 彭佩莹 彭夕洋 王静 赵阳 陈思行
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: gcm 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 196-199
• 页数: 4页
• 分类号: Q71
• 字数: 3359字
• 语种: 中文

摘要

gcm(glial cells missing)是调控神经元细胞和神经胶质细胞相互转化的一个基因开关.在gcm功能缺损的突变体中,预期的神经胶质细胞发育成神经元细胞；而在gcm过表达的突变体中,预期的神经元细胞转化为神经胶质细胞.此外,gcm还调控血浆细胞发育.为了进一步研究gcm在发育中的功能,需要获得gcm蛋白并制备其抗体.根据已报道的gcm基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增得到gcm部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体以获得原核表达载体.重组载体经酶切测序鉴定确认后,转化大肠杆菌(Ecoli)BL21,并用IPTG诱导融合蛋白表达.采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化蛋白,将纯化的His-gcm融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价.获得的gcm原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗gcm多克隆抗体,为gcm功能的进一步研究奠定了基础.