羧甲基壳聚糖对体外培养雪旺细胞增殖周期及其分泌神经营养因子的影响

• 作者: 刘世清 卫爱林 贺斌 陶海鹰
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 羧甲基壳聚糖 雪旺细胞 细胞增殖 神经营养因子 大鼠
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 923-927
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20130203

摘要

目的 探讨羧甲基壳聚糖(carboxymethylated chitosan,CMCS)对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)增殖周期及分泌神经营养因子的影响及其作用机制. 方法 取3～5日龄SPF级SD大鼠20只,雌雄不限,体重25～30 g,取双侧坐骨神经体外培养SCs,经S-100免疫荧光标记鉴定.取处于对数生长期的第2代SCs,细胞计数检测试剂盒8检测不同浓度CMCS及作用不同时间对SCs增殖的影响.将SCs分为4组,加入CMCS调整终浓度为50 (B组)、100(C组)、200 μg/mL(D组),对照组(A组)加入等量PBS,流式细胞技术检测处于S期细胞的百分比(S％)和增殖指数(proliferation index,PI)分析细胞周期;实时定量PCR与Western blot检测SCs合成NGF和睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)的含量. 结果 S-100免疫荧光标记鉴定示细胞阳性率达90％以上.CMCS在10～1 000.g/mL浓度范围内对SCs增殖均有促进作用,200、500 μg/mL组促增殖效应最明显(P＜ 0.01),200 μg/mL与500 μg/mL组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).采用200 μg/mL CMCS培养SCs不同时间,发现作用24 h时其促增殖效果最明显,与对照组(200 μg/mL CMCS作用0h)比较差异有统计学意义(P＜0.01).B、C、D组S％及PI均显著高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);C、D组显著高于B组(P＜ 0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).实时定量PCR和Western blot检测均显示,B、C、D组NGF与CNTF mRNA和蛋白表达均显著高于A组(P＜0.05);其中D组作用最明显. 结论 CMCS可以促进SCs增殖及细胞周期进程以及分泌神经营养因子.