具分泌几丁质酶活性的生防细菌的筛选鉴定及其几丁质酶基因的克隆和表达

• 作者: 李宝庆 李社增 杜锦锦 石磊 郭庆港 马平 鹿秀云
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 萎缩芽胞杆菌 生防菌 几丁质酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 149-156
• 页数: 8页
• 分类号: S432
• 字数: 6134字
• 语种: 中文

摘要

本研究通过平板透明圈法筛选获得一株具有几丁质酶活性的生防细菌CAB-1,该菌株对番茄灰霉病菌等多种病原真菌表现较强的拮抗活性.通过生理生化、16S rDNA和gyrB基因序列测定,将菌株CAB-1鉴定为萎缩芽胞杆菌(Bacillus atrophaeus).对菌株CAB-1全基因组序列进行分析和功能预测,发现该菌株存在2个几丁质酶编码基因chit1和chit2.通过PCR技术从菌株CAB-1中克隆出这两个几丁质酶的编码基因并在大肠杆菌中表达,其原核表达产物均表现几丁质酶活性,其中chit1的原核表达产物能够显著抑制灰霉菌分生孢子的萌发.对其原核表达条件进行优化,发现在30℃下振荡培养24h,IPTG浓度为0.2～ 1.0 mmol/L时,其蛋白表达量最高.