人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建?*☆

• 作者: 余淦 余虓 叶章群 徐华 李恒 王博涵 肖巍
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织构建细胞学实验 慢病毒载体 KLF4 基因 基因重组 5637 细胞 载体质粒 DNA测序 组织工程 泌尿系肿瘤 大肠杆菌 DH5a 感受态细胞 国家自然科学基金 组织构建图片文章
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 页码范围: 1238-1242
• 分类号: R318
• 字数: 4051字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.07.018

摘要

背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用.目的:构建 KLF4基因慢病毒过表达载体.方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因 KLF4后插入慢病毒表达载体 pCDH 中,构建重组载体pCDH-KLF4.通过 PCR、双酶切和 DNA 测序方法对其鉴定,共同转染293NT 细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度.将重组的慢病毒感染5637细胞, RT-PCR 检测 KLF4 mRNA 的表达.结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和 DNA 测序分析证实重组慢病毒载体 pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内 KLF4 mRNA 高表达.结果证实,实验成功构建 KLF4基因慢病毒过表达载体.