汉滩病毒包膜糖蛋白糖基化位点突变体重组假病毒的构建及初步鉴定

• 作者: 于澜 刘梓谕 吴兴安 张亮 张蕾 徐志凯 王芳 程林峰 薛添
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 汉滩病毒 包膜糖蛋白 糖基化位点突变株 重组假病毒
• 年，卷（期）: 2013,（30）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5811-5816,5824
• 分类号: Q75|Q78|R373
• 语种: 中文

摘要

目的:为进一步研究汉坦病毒包膜糖蛋白的糖基化与病毒的感染性和免疫原性等的关系,构建含有汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(GP)糖基化位点突变体的重组假病毒.方法:利用定点突变的方法,分别突变了HTNV 76-118株的5个N-糖基化位点并克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,构建5株重组假病毒.感染HEK293细胞后,进行RT-PCR鉴定及免疫荧光检测.结果:经测序显示构建的含有N-糖基化位点突变体的5个重组假病毒原序列中的天冬酰胺(N)均被置换为谷氨酰胺(Q).RT-PCR结果显示5个重组假病毒均有HTNV GP基因的表达.免疫荧光检测5个重组假病毒均可表达HTNV的Gn和Gc蛋白.结论:成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白糖基化位点突变体的5个重组假病毒,分别命名为rLV-M1、rLV-M2、rLV-M3、rLV-M4和rLV-M5.本研究为明确N-糖基化对汉坦病毒生物学活性的影响提供了有利的研究工具,并为汉坦病毒疫苗及致病机理的进一步研究打下了一定的基础.