桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、组织表达及配基结合特性

• 作者: 倪翠侠 周宇翔 商晗武 张林雅 李红亮 赵磊 陈玲
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 桔小实蝇 气味结合蛋白 组织表达谱 原核表达 荧光竞争结合实验
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 612-621
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对该基因进行了原核表达.BdorOBP2开放阅读框长447 bp,编码148个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点.定量PCR结果显示,桔小实蝇BdorOBP2在不同组织中均有表达,其中头部中的表达量最高,翅中表达量最低(为头部表达量的63％±6％).构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导并获得了重组BdorOBP2并进行了亲和层析纯化.最后以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,利用荧光竞争结合实验测定了重组BdorOBP2与7种主要寄主水果气味物质的结合能力,发现其对多数酯类和醛类化合物亲合力较强,亲合力最强的气味物质为反-2-己烯醛和β-紫罗兰酮,结合常数KD分别为9.96和15.37μmol/L.本研究结果可为高效地开发和设计桔小实蝇的嗅觉引诱剂配方提供一定的理论依据和参考.