房水培养对牛角膜内皮细胞生长的影响

• 作者: 丁勇 戴应 李善义 谭美华 钟敬祥 陈建苏
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 房水 角膜内皮细胞 增生 细胞培养
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 127-131
• 页数: 5页
• 字数: 4928字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2013.02.005

摘要

背景 组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞(CECs),因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题. 目的 观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响. 方法 从新鲜牛眼球前房抽取1.2 ml房水,经消毒过滤后取上清备用.从牛眼角膜组织分离牛CECs并用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液进行培养传代.分别在培养液中加入不同体积的房水,使房水终体积分数分别为2.5％、5.0％、10.0％、15.0％、20.0％,对照组不加房水,利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测各组细胞在450 nm处的吸光度(A450)值.流式细胞仪分析10.0％房水培养对CECs细胞周期的影响.待培养细胞融合成单层后,1 ml塑料枪头尖端在培养皿底划痕并用含10％胎牛血清的DMEM培养液中加入10.0％房水培养24 h,未加入房水的培养液作为对照组,检测细胞单层的愈合情况.将细胞以6×105个/ml密度接种到培养皿中,分别用含10.0％房水的培养液和无房水的培养液孵育5d,利用DAPI荧光染色技术分析细胞密度. 结果 培养的CECs呈六角形、铺路石样的扁平状.CCK-8比色法检测表明,各培养组细胞的A450值总体比较差异有统计学意义(F=4.051,P=0.007)；与对照组比较,各房水培养组细胞的A450值均明显高于对照组,以含10.0％房水培养组CECs的A450值最高,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术分析表明,10.0％房水孵育24 h后,处于S-G2期的细胞比例为(34.80±3.13)％,对照组为(23.06±1.13)％,差异有统计学意义(t=-5.729,P=0.005).划痕愈合分析检测表明,10.0％房水组的细胞单层划痕面积为(0.116±0.019) mm2,对照组为(0.358±0.049) mm2,差异有统计学意义(t=13.842,P=0.000).DAPI荧光染色结果显示,10.0％房水组的平均细胞密度为(1439±110)个/视野,大于对照组的(1162±45)个/视野,差异有统计学意义(t=-11.020,P=0.000).结论 房水作用于培养的牛CECs后可促进CECs的生长,10.0％房水对培养的CECs有促进角膜细胞增生的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟敬祥	暨南大学附属第一医院眼科	49	150	6.0	8.0
2	丁勇	暨南大学附属第一医院眼科	30	217	9.0	13.0
3	李善义	暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所	4	12	3.0	3.0
4	戴应	暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所	4	10	3.0	3.0
5	谭美华	暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所	6	16	3.0	3.0