敲减SOX9基因对骨髓间充质干细胞表达的影响

• 作者: 康宁 杜少华 杨自权 梁大川 王震 白洁玉 程鹏
• 来源期刊: 中国骨伤
• 关键词: SOX9 慢病毒属 转染 骨髓间充质干细胞细胞
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 760-763
• 页数: 4页
• 字数: 3523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2013.09.014

摘要

目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响.方法:针对小鼠SOX9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-SOX9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增.利用SOX9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率.同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达.结果:成功构建了Lenti-SOX9-siRNA-EGFP,SOX9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞.RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默.结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且SOX9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础.