碳青霉烯类抗生素诱导铜绿假单胞菌外膜蛋白及外排系统突变的机制研究

• 作者: 曾章锐 王卫萍 王莹 邵海枫
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 碳青霉烯类 铜绿假单胞菌 外膜蛋白 OprD 外排系统
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 450-454
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 字数: 4017字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨临床分离的因外膜蛋白突变导致的铜绿假单胞菌(Pa)碳青霉烯类耐药机制是否与药物诱导相关.方法 在M-H平板上用亚胺培南(IPM)和美罗培南(MEM)药敏纸片分别诱导3株Pa(Pa标、Pa1和Pa2).琼脂稀释法测定诱导前后Pa对IPM、MEM、头孢他啶和头孢吡肟4种药物的最低抑菌浓度(MIC).改良三维试验检测诱导后产碳青霉烯酶变化.SDS-PAGE观察Pa外膜蛋白OprD的改变.PCR扩增oprD基因并进行序列分析.实时荧光定量PCR检测Pa外排系统表达情况.并对诱导耐药菌株进行稳定性分析.结果 诱导第5天出现对IPM和MEM耐药(MIC≥8 μg/mL),且MEM诱导株对2种药物敏感性降低速度明显快于IPM诱导株.诱导株未检出耐药酶,外膜蛋白OprD出现缺失或者减少.oprD基因测序发现Pa标(I)、Pa标(M)和Pa1 (M)分别在831(TGG→TGA)、1017 (TGG→TGA)和1014(TGG→TAG)有碱基突变产生终止密码子,Pa2(I)在1 206处有新的碱基插入导致移码突变.外排基因以MexA过度表达为主,同时伴有其他外排系统的过度表达.稳定性分析发现5株诱导株的耐药表型稳定,另1株外排系统表达量呈现持续升高,导致MIC值的右移.结论 在碳青霉烯类药物环境中,外膜蛋白OprD表达减少和基因的突变以及外排系统的过度表达是引起诱导株对IPM和MEM耐药的主要原因.此型耐药株不仅耐药表型稳定,甚至可能由于某种机制导致脱离药物后MIC值仍持续升高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵海枫	南京军区南京总医院临床中心实验科微生物室	152	783	14.0	20.0
2	王卫萍	南京军区南京总医院临床中心实验科微生物室	112	620	13.0	18.0
3	王莹	南京军区南京总医院临床中心实验科微生物室	19	70	5.0	7.0
4	曾章锐	南京军区南京总医院临床中心实验科微生物室	5	50	4.0	5.0