泛素C端水解酶L1的RNA干扰载体的构建及效果评价

• 作者: 冷雪 刘晓华 张志清 张艳淑 武磊 段梦 段瑞峰 王广增 王立群 赵博
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素C端水解酶 L1 RNA 干扰 HEK293 细胞 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 188-192
• 分类号: Q78
• 字数: 3428字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.02.010

摘要

目的:获得抑制效果好的泛素 C 端水解酶 L1(UCH-L1)基小干扰 RNA(siRNA)干扰载体.方法:根据 Gen?Bank 中大鼠 UCH-L1基序列设计并合成4对 siRNA 寡核苷酸序列,将4对寡核苷酸序列退火成双链后分别插入siRNA 表达载体 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 中构建4个 siRNA 表达质粒,测序鉴定后将4个 siRNA 表达质粒分别转染 HEK293细胞,利用 Western 印迹和 qPCR 方法检测干扰效果;将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒,感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),并采用 TNFα干预诱导 UCH-L1表达升高,Western 印迹验证干扰效果.结果:测序分析证实4对 siRNA 寡核苷酸序列分别插入 siRNA 表达载体 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR;qPCR 检测与 Western 印迹均表明第3号 siRNA 表达载体对 UCH-L1表达的抑制程度最高,将其包装成腺病毒并转染 VSMC 能显著抑制 TNFα诱导的UCH-L1表达升高.结论:构建并筛选出干扰效果好的 UCH-L1 siRNA 干扰载体.