PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株qPCR区分方法的建立与应用

• 作者: 于江 刘思当 刘月月 吴家强 杜以军 王兴东 王金宝 赵鹏伟 陶海英
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征 qPCR 体外转录 Nsp2基因
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 57-61
• 页数: 5页
• 分类号: S811.6
• 字数: 3485字
• 语种: 中文

摘要

为快速准确区分PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株以及对流行毒株进行定量检测,按GenBank中发表的美洲型PRRSV SX-1分离株、弱毒疫苗株NSP2基因缺失部位的不同设计了一对特异性引物,通过RT-PCR和体外转录的方法,构建了体外转录RNA作为标准品,并对反应条件和反应体系进行优化,旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性和稳定性良好的qPCR鉴别方法.结果表明,该方法最低能检测出1.0×10(1)拷贝/μL的模板,敏感性比常规PCR高100倍；应用该方法对218份临床样本进行鉴别与定量,qPCR检出率较常规RT-PCR高12.9个百分点.研究表明,qPCR鉴别方法的建立实现了对PRRS流行毒株与疫苗毒株的快速区分以及对流行毒株的定量检测,为PRRS的快速诊断提供了依据.