猪抑制素α亚基基因克隆及其原核表达

• 作者: 刘颖 施振旦 陈倩 黎敏义
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 蓝塘猪 抑制素α亚基 成熟肽 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 108-113
• 页数: 6页
• 分类号: Q812
• 字数: 4418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.01.018

摘要

为了克隆猪抑制素α亚基基因和表达其重组蛋白质,本试验采集发情期蓝塘猪卵巢组织,并从中快速抽提总RNA,以此作为模板并根据猪抑制素α亚基基因编码区序列(GenBank号:NM214189)设计合成1对引物,经反转录扩增获得了猪抑制素α亚基基因编码区全长序列.另外,再设计1对特异性引物以扩增抑制素α亚基成熟肽cDNA,并将扩增产物克隆到表达载体pRSET A的％lⅡ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,构建重组质粒pINH-SCAU并转化Escherichiα.coli BL21 (DE3)株.转化重组质粒pINH-SCAU的重组菌经IPTG诱导后表达的重组蛋白质分子量为20 000,经Ni-NTA凝胶纯化和兔抗牛抑制素α亚基抗体的特异性免疫反应,证明为抑制素α亚基重组融合蛋白质.对蛋白质表达条件的比较,结果显示重组菌经常规诱导剂0.05 mmol/L IPTG诱导5h后的细菌生长密度OD6∞值为2,抑制素α亚基重组融合蛋白质的最高表达量为总菌体蛋白质量的32.00％.采用自动诱导培养基替代IPTG,在诱导18 h后能使菌液的OD600达13,同时自动诱导的抑制素融合蛋白质表达量占菌体总蛋白质的32.57％.因此利用自动诱导培养基可以获得较佳的抑制素重组整合蛋白质.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘颖	华南农业大学动物科学学院	42	207	8.0	12.0
2	施振旦	江苏省农业科学院畜牧研究所	72	277	9.0	11.0
3	黎敏义	华南农业大学动物科学学院	5	30	4.0	5.0
4	陈倩	华南农业大学动物科学学院	1	5	1.0	1.0