草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 吴淑勤 曾伟伟 王庆 王英英 石存斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 VP4蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 450-456
• 分类号: Q511|S917.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38410

摘要

为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/O细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5.抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为K链；间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应.选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000；IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子.本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础.