嵌合O型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病毒VLPs载体疫苗的构建

• 作者: 何孔旺 夏兴霞 欧阳伟 毕振威 潘群兴 王晓丽 王永山 诸玉梅
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 O型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 分子设计
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 101-107
• 页数: 7页
• 分类号: S858.28
• 字数: 5194字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.01.017

摘要

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21 ～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中,转化E coli DH10Bac感受态细胞,经三抗筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1∶PPV VP2,用脂质体法转染Sf9细胞.对rBac-FMDVVP1∶PPV VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光；用Western-blotting分析,在64 000处出现一条特异蛋白条带；电镜观察,重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒.红细胞凝集试验证实,表达的嵌合蛋白PPV∶VP2-FMDV∶VP1具有与全病毒类似的血凝活性.