基于水凝胶的基因组DNA固定法研究

• 作者: 张伟 潘映秋 陈枢青
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA/分析 基因组 聚合酶链反应 基因扩增 水凝胶 电泳,聚丙烯酰氨凝胶
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 6-13
• 页数: 8页
• 分类号: Q343.1
• 字数: 5659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2013.01.002

摘要

目的:通过对人基因组DNA固定化的研究,探讨特异性高的单点共价固定方法,实现对人基因组DNA的反复利用.方法:选取Mirzabekov等发明的DNA-水凝胶共聚化学法作为基因组DNA固定方法,使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,以(CH2)6-NH2氨基末端修饰的PCR产物及甲酸随机断裂修饰的pGEM-T-HLA-G质粒为模板,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其固定效率,并通过PCR法检测该固定方法的热稳定性.将该法初步应用于人类基因组DNA的固定和反复利用,对基因组DNA扩增的片段进行测序,排除突变可能.结果:使用甲基丙烯酰胺凝胶作为固相支持载体,实现了对质粒DNA以及人基因组DNA的固定和反复使用,该方法可以经受16轮的PCR扩增(每轮36个循环).测序结果证实基因组DNA的扩增片段未发生突变.结论:甲基丙烯酰胺凝胶法固定DNA的热稳定性好,特异性高,可用于全基因组测序及SNP检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟	浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所	93	456	11.0	17.0
2	陈枢青	浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所	80	249	8.0	11.0