精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响

• 作者: 张丽红 张伟 张琦 徐志才 房玉英 李丽 王时灿 王琳琳 许观照
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 关键词: 人类精子 DNA碎片 冷冻保存 上游法处理技术 精子染色质扩散实验
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 945-950
• 页数: 6页
• 字数: 3852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2013.12.011

摘要

目的 通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响. 方法 (1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性.结果 (1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)％]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)％](P＜0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)％vs.(23.6±7.8)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液(P＜0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P＞0.05).(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)％降为(6.4±2.5)％(P＜0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)％ vs.(23.6±7.8)％和(9.7±2.6)％ vs.(25.9±7.2)％](P＜0.05). 结论 冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响.不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异.不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子.