慢病毒介导的shRNA靶向干扰β-catenin神经母细胞瘤稳定细胞株的建立

• 作者: 姚伟 徐挺 李凯 王作鹏 肖现民
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 神经母细胞瘤 RNA干扰 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 290-294
• 页数: 5页
• 字数: 4952字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2013.04.014

摘要

目的 建立稳定抑制β-eatenin基因表达的入神经母细胞瘤BE2C细胞株,为探讨Wnt/-eatenin信号在神经母细胞瘤发生中的作用提供细胞模型.方法 使用Real-time PCR、Westernblot的方法检测BE2C细胞中β-catenin在基因及蛋白水平的表达.于β-catenin基因编码区选择4个siRNA靶点及1个非编码序列(NC)合成5对shRNA干扰序列,分别与质粒PgLV-H1-GFP+ Puro载体连接,构建重组质粒；将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染BE2C细胞,筛选出干扰效果最佳的shRNA序列,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株.RT-PCR、Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率.结果 RT-PCR、Western blot检测显示BE2C细胞中β-catenin在基因及蛋白水平均有较好的表达；慢病毒的滴度达到1×108 TU/ml时,侵染BE2C细胞的效率可达到90％左右；通过RT-PCR和Western blot检测结果显示G1为最有效的干扰靶点；通过嘌呤霉素筛选得到稳定靶向干扰β-catenin细胞株,抑制效率可达约90％.结论 成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-eatenin基因表达的人神经母细胞瘤BE2C细胞株,为进一步研究β-catenin在神经母细胞瘤发生中的作用提供了可靠的细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凯	复旦大学附属儿科医院外科	91	312	10.0	13.0
2	姚伟	复旦大学附属儿科医院外科	80	546	10.0	21.0
3	肖现民	复旦大学附属儿科医院外科	176	823	13.0	19.0
4	王作鹏	复旦大学附属儿科医院外科	12	31	3.0	5.0
5	徐挺	复旦大学附属儿科医院外科	4	19	3.0	4.0