体外培养不同时间后冻存对脐血来源CIK细胞生物学活性的影响

• 作者: 张校通 漆巨兰 王小燕 王翔 申重阳 赵令卉 邓红梅 郑榆坤 陈静娴
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞因子诱导杀伤细胞 冻存 细胞毒活性 免疫表型
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 342-347
• 分类号: R392.33|R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.03.015

摘要

目的:观察体外培养不同时间后冻存对人脐血来源细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞增殖、免疫表型、细胞毒活性以及细胞因子分泌的影响.方法:CIK细胞在体外培养6、9、12 d后冻存1个月,复苏后培养至72 h,其间每隔24 h检测细胞增殖情况,并采用流式细胞术检测复苏后细胞免疫表型、CCK-8法检测复苏后细胞对A549细胞的杀伤活性、ELISA方法检测复苏后CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的变化.结果:体外培养不同时间后冻存的CIK细胞在复苏后仍然显示出较好的增殖活性,其中,体外培养6d后冻存组CIK细胞增殖活性明显高于体外培养9d和12 d后冻存组CIK细胞,复苏72 h时,6、9、12d冻存组CIK细胞数分别为(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106个(P ＜0.01).体外培养6、9、12 d后冻存组CIK细胞复苏24h后,各冻存组CD3+ CD56+、CD3+ CD8+细胞比例逐渐增加,且复苏72 h后6d冻存组CIK细胞中CD3+ CD56+和CD3+ CD8+细胞比例最低.体外培养后冻存组CIK细胞在复苏24h内对A549细胞的杀伤活性较低,但24 h后细胞毒活性有较大幅度的增加,且体外培养12 d后冻存组CIK细胞对A549细胞的杀伤活性高于6d和9d冻存组CIK细胞,如复苏后72 h,12、6、9d冻存组CIK细胞对A549细胞的抑瘤率分别为(0.81±0.09)％、(0.59±0.06)％、(0.42±0.08)％(P ＜0.01).ELISA检测结果显示,随着复苏时间的延长,体外培养不同时间后冻存的CIK细胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐渐上升；复苏72 h时,体外培养6d后冻存组CIK细胞分泌IFN-γ的量要高于其他组,而体外培养12 d后冻存组TNF-α的分泌量则明显高于其他组.结论:体外培养不同时间后冻存对CIK细胞的生物学活性有一定影响,但复苏后经短时间培养后基本恢复,提示CIK细胞可以在培养至12 d后进行冻存.