基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法研究

• 作者: 庞正 李川 李建东 李德新 梁米芳
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 多重置换扩增 Phi29 DNA聚合酶 RNA病毒
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 432-436
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

为了便于新发或罕见病毒性传染病的筛查检测,本研究利用多重置换扩增技术,以负链RNA病毒一发热伴血小板减少综合征病毒和正链RNA病毒一登革病毒为模拟样本探索临床样本中RNA病毒基因组非特异性扩增方法.研究中通过梯度稀释的RNA病毒模拟样本中可能存在的不同丰度的病原体,样本核酸依次加工成单链cDNA、双链cDNA、T4 DNA连接酶处理后的双链cDNA以及添加外源辅助RNA后合成并连接的双链cDNA形式,然后进行Phi29 DNA聚合酶等温扩增,使用荧光定量PCR方法比较各种方法对RNA病毒核酸扩增的影响.结果显示,对于不同类型的RNA病毒模拟标本,多重置换扩增对于单链及双链cDNA的扩增效果有限,而双链cDNA经DNA连接酶处理后的扩增能达到6×103倍；在cDNA合成过程中加入外源辅助RNA,模拟样本中病毒基因组的扩增可达2×105倍,尤其是对含有低丰度病原体的模拟样本扩增效果的改善更为明显.本研究摸索建立了基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法,能够对样本中低丰度RNA病毒基因组实现有效扩增,可满足开展多种病原体筛查检测的需求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁米芳		52	102	5.0	8.0
2	李德新		67	367	7.0	18.0
3	李川		38	55	4.0	6.0
4	李建东		24	135	5.0	11.0
5	庞正		3	0	0.0	0.0