昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

• 作者: 任卫青 吕婧玉 张志平 李小佳 王新庄 翟明胜 许晓婷 邓立新
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胚胎干细胞 饲养层 培养液 优化 小鼠
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 316-321
• 页数: 6页
• 分类号: Q28
• 字数: 4698字
• 语种: 中文

摘要

为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化.将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+ 15％ KSR+ LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF十胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响.结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P＜0.05).囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P＜0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P＜0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率.所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点.由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王新庄	河南农业大学牧医工程学院	53	175	7.0	9.0
2	邓立新	河南农业大学牧医工程学院	110	344	11.0	15.0
3	任卫青	河南农业大学牧医工程学院	10	35	4.0	5.0
4	张志平	河南农业大学牧医工程学院	25	54	4.0	6.0
5	吕婧玉	河南农业大学牧医工程学院	10	35	4.0	5.0
6	许晓婷	河南农业大学牧医工程学院	7	28	4.0	4.0
7	翟明胜	河南农业大学牧医工程学院	7	23	3.0	4.0
8	李小佳	河南农业大学牧医工程学院	5	10	2.0	3.0