铜绿假单胞菌外毒素A基因的克隆与原核表达

• 作者: 吴建勇 李建军 杨学云 王治才 王登峰
• 来源期刊: 草食家畜
• 关键词: 铜绿假单胞菌 外毒素A 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 疫病防治
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: S852.6
• 语种: 中文

摘要

为建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A(Exotoxin A,ETA)的原核表达方法,采用PCR技术扩eta基因,将其插入pET-28a载体构建重组质粒pET-28a-eta,并对重组质粒进行双酶切、PCR及测序鉴定.转入BL21(DE3)中诱导表达,检测目的蛋白大小及反应原性,然后进行表达条件的优化及其表达形式检测.结果表明,所扩增eta基因大小为1917 bp,与GeneBank参比序列一致性在98.70％;蛋白分析表明,rETA大小为74 KDa,具有和天然毒素相似的反应原性.目的基因在37℃、0.6 mmol/LIPTG诱导3h获得最佳表达.该蛋白在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主.该研究为进一步开展ETA的批量纯化提供了前提条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王治才	新疆畜牧科学院兽医研究所	46	303	10.0	15.0
2	吴建勇	新疆畜牧科学院兽医研究所	18	75	5.0	8.0
3	李建军	新疆畜牧科学院兽医研究所	45	277	9.0	14.0
4	杨学云	新疆畜牧科学院兽医研究所	36	227	9.0	14.0
5	王登峰	新疆畜牧科学院兽医研究所	29	182	7.0	12.0