柯萨奇病毒B5巢式RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘国华 李幸乐 段晶晶 王芳 胡小宁 许汴利 黄学勇
• 来源期刊: 郑州大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 柯萨奇病毒B5 巢式RT-PCR 检测
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 349-352
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2+3
• 字数: 2638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2013.03.015

摘要

目的:建立一种快速、灵敏、特异的柯萨奇病毒B5(CVB5)检测方法.方法:根据GenBank 发表的CVB5河南分离株全基因组序列,在其VP1 区设计并合成巢式RT-PCR引物,优化PCR反应条件,建立检测CVB5的巢式RT-PCR方法.将已测得TCID50的病毒标准株进行10倍梯度稀释后用上述方法检测,以评价该方法的灵敏性;将5株不同的CVB5毒株和EV71等4株其他肠道病毒毒株及阴性对照用该方法进行扩增,以检测其特异性.用建立的巢式RT-PCR方法对52份病毒性脑炎病例样本进行检测.结果:该方法对CVB5的两轮PCR扩增敏感性分别为10 TCID50和10-4 TCID50;所有CVB5毒株用该方法扩增结果均为阳性,所选其他肠道病毒扩增结果均为阴性.52份临床病例样本中检出10份CVB5阳性,阳性率为19.23%.结论:所建立的CVB5巢式RT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异度.