甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建

• 作者: 付三雄 周晓婴 张超 戚存扣 陈松
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蓝型油菜 丙酮酸激酶 RNA干扰 载体构建
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·耕作栽培·生理生化
• 页码范围: 20-27
• 页数: 8页
• 分类号: S565.4
• 字数: 5888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.01.004

摘要

采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因.为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用NotⅠ和Xho Ⅰ酶切,酶切产物连接到RNAi平台载体pHurricane的NotⅠ和Xho Ⅰ位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体.限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础.