猕猴抵抗素基因克隆及序列分析

• 作者: 和占龙 李艳艳 杨凤梅 王俊斌 禹文海 赵远 陈丽雄 鲁帅尧
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 抵抗素 基因克隆 猕猴
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-27,38
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.01.005

摘要

目的 克隆猕猴抵抗素基因,并对其进行鉴定及序列分析.方法 用猕猴腹部脂肪组织提取总RNA,采用RT-PCR进行抵抗素基因扩增,克隆至质粒载体,通过PCR和酶切鉴定后,进行测序,用DNAMAM软件进行序列分析,再用ORFfinder软件确定其编码区,并用BLAST软件比对.结果 RT-PCR产物电泳检测得到了363 bp目的条带,重组克隆质粒经PCR和XbaⅠ与PstⅠ双酶切鉴定均为阳性,测序结果经序列分析表明,其与人类抵抗素基因序列的同源性为96％,与大鼠的同源性为67％,与小鼠的同源性为65.7％,基于抵抗素基因的进化树结果表明猕猴与人类有较近的亲缘关系;ORFfinder软件的分析结果表明,编码猕猴抵抗素的氨基酸有108个,与人类抵抗素氨基酸的同源性为92％,仍然具有较高的同源性.结论 成功克隆了猕猴抵抗素基因,可为下一步在猕猴中开展相关研究奠定前期基础和提供实验资料.