石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨

• 作者: 亓翠玲 兰天 关新元 卢玉芬 李江超 王丽京 章倩倩 陈金娜
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 石蜡组织 荧光原位杂交 蛋白消化 DNA变性 DAPI染色
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 398-401
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 3694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.024

摘要

目的：探讨石蜡组织荧光原位杂交（FISH）技术中关键实验步骤的最佳条件，以期提高石蜡切片FISH阳性细胞检出率和实验成功率。方法：在前期标本处理方面，进行双蒸水、0.5×SSC溶液、0.1%硫代亚硫酸钠溶液煮沸对比；在蛋白酶消化方面，设置胃蛋白酶和蛋白酶K两种消化方法，并在37℃条件下设置时间的梯度变化，比较其消化效果；对石蜡切片的变性设置温度梯度，比较杂交检出率；比较DAPI复染时不同浓度对单色、双色FISH结果的影响；应用抗淬灭剂后不同保存时间的对比。结果：采用0.5×SSC溶液煮沸15 min，用200μg/mL蛋白酶K在37℃、6~10 min条件下消化，可以取得较好的FISH效果；变性温度为81℃时检出率更高，DAPI复染浓度为1000 ng/mL时针对单色FISH较合适，而浓度为500、150 ng/mL时针对双色/多色FISH有较好的效果。结论：FISH条件经过对比得到优化，对石蜡组织FISH实验具有一定的指导意义。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关新元	香港大学临床肿瘤研究部	28	212	10.0	13.0
2	王丽京	广东药学院血管研究所	97	294	7.0	12.0
3	章倩倩	广东药学院血管研究所	18	25	3.0	3.0
4	亓翠玲	广东药学院血管研究所	37	136	4.0	9.0
5	兰天	广东药学院血管研究所	20	82	5.0	8.0
6	李江超	广东药学院血管研究所	16	32	3.0	4.0
7	陈金娜	香港大学临床肿瘤研究部	2	2	1.0	1.0
8	卢玉芬	桂林医学院生物技术系	1	1	1.0	1.0