用于高度降解mRNA样本的非反转录基因表达量测定方法

• 作者: 刘敏 周国华 唐晓闻 李桂梅 邹秉杰
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 连接反应 基因表达量 高度降解RNA 实时荧光定量PCR 石蜡包埋组织样本
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1165-1170
• 页数: 6页
• 字数: 3344字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2013.21151

摘要

许多生物样本(如石蜡包埋组织样本)中的mRNA易断裂为小片段,利用传统方法检测较困难.为了测定高度降解的mRNA,本研究针对待测mRNA短片段设计一对探针,当探针与待测模板杂交后,通过连接反应将两条探针5′与3′端相连,连接产物作为PCR扩增模板进行实时荧光定量检测,从而对待测mRNA进行定量测定.以人ACTB基因为待测靶标,通过测定不同浓度的待测靶标及与待测靶标序列不同的RNA片段,分别考察方法的灵敏度与特异性,并检测肺癌石蜡切片样本中ACTB基因的表达量,与传统的反转录定量PCR检测结果进行了对比.本方法的检出限为150 fmol/L,定量线性范围为150 fmol/L～300 pmol/L,并且具有良好的特异性.在对石蜡包埋组织样本中的基因表达量检测时,本方法扩增检测CT值比反转录实时定量PCR小,表明本方法更适合对高度降解的mRNA样本进行定量测定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周国华	南京医科大学基础医学院	73	360	10.0	15.0
5	邹秉杰	南京军区南京总医院药理科	11	41	4.0	6.0
6	李桂梅	中国人民解放军第八一医院病理科	13	132	5.0	11.0
7	唐晓闻	南京医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
11	刘敏		1	0	0.0	0.0