利用Pen a1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究

• 作者: 兰丽平 潘家荣 牟慧 睢珂 许舒婷 赵杰 高美须
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 工学
• 关键词: Pen a 1 表位抗体 免疫亲和柱 ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1174-1179
• 页数: 6页
• 分类号: O766.1|TQ424.27
• 字数: 5055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2013.10.004

摘要

以虾致敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ～284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH(匙孔血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶联制备人工免疫抗原(Pep-tide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱(HiTrap rProtein A FF)纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B(CNBr-Activated Sepharose 4B)进行偶联.ELISA(酶联免疫吸附试验)测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50(50％抑制浓度)为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pena 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76％.间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6％～93.6％,亲和柱使用寿命为4次.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高美须	中国农业科学院农产品加工研究所	50	692	14.0	24.0
2	牟慧	中国农业科学院农产品加工研究所	6	30	3.0	5.0
3	潘家荣	中国计量学院生命科学院	30	151	7.0	11.0
4	赵杰	中国农业科学院农产品加工研究所	25	175	8.0	12.0
5	许舒婷	中国农业科学院农产品加工研究所	3	31	2.0	3.0
6	睢珂	中国农业科学院农产品加工研究所	2	2	1.0	1.0
7	兰丽平	中国农业科学院农产品加工研究所	1	2	1.0	1.0