黄喉拟水龟巨噬细胞炎症蛋白-3α重组表达及抗菌活性分析

• 作者: 史燕 朱新平 洪孝友 赵建 龙建杰
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄喉拟水龟 巨噬细胞炎症蛋白-3α 重组表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 593-598
• 分类号: S943
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38304

摘要

巨噬细胞炎症蛋白-3α是一种可诱导的分泌蛋白,通过相应受体对多种免疫细胞产生趋化,在多种疾病的免疫反应和炎症损伤中发挥重要作用.实验采用RT-PCR技术克隆出黄喉拟水龟巨噬细胞炎症蛋白-3α(MaCCL20)的成熟肽基因序列,通过双酶切将目的基因序列插入到表达载体pET-32a上,然后转化进大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后表达出了pET-32a-CCL20融合蛋白,以该融合蛋白为抗原制备多克隆抗体并进行Western-blotting鉴定及抑菌性检测.实验表明,融合蛋白在37℃、0.8 mmol/L IPTG,4h条件下得到高效表达；经SDSPAGE凝胶电泳和Western-blotting分析显示,所表达融合蛋白相对分子量为30 ku,与预测蛋白大小一致并与带His标签的多克隆抗体发生特异性反应.经His Bind镍柱纯化后SDSPAGE电泳检测出现单一条带,说明获得了纯度较高的MaCCL20重组蛋白.抑菌实验表明,MaCCL20重组蛋白对金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌和嗜水气单胞菌都有较强的抑菌作用.