罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910转录调控因子rovS基因的克隆及表达研究

• 作者: 吴灶和 李桂欢 汤菊芬 王蓓 简纪常 蔡双虎 鲁义善 黄郁葱
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌ZQ0910 RovS转录调控因子 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 584-592
• 分类号: S943
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38348

摘要

为了对罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株毒力相关转录调控因子rovS进行克隆及表达研究,实验根据GenBank上登录的相关基因设计引物,采用PCR方法扩增该株细菌的rovS基因,然后将该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达.结果显示,该基因有849个碱基,编码282个氨基酸；同源基因序列比对显示,无乳链球菌ZQ0910株与无乳链球菌2603 V与ATCC13813的rovS基因的同源性最高；经IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为34 ku;用亲和层析后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经ELISA检测效价达到1∶512000.研究结果表明,实验成功克隆与表达了rovS基因,为深入探讨RovS调节因子在调节细菌的代谢、生长和毒力等多种生命活动中的作用提供了理论依据.