小鼠腔前卵泡三维培养成熟后受精体系的建立及优化

• 作者: 侯震晖 曾荔苹 朱玥荃 李慧 林晓潭 林桂淼 林苏霞 王晓梅 蔡志明
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 腔前卵泡 三维培养
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 210-214
• 页数: 5页
• 分类号: R132.1
• 字数: 4689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2013.03.011

摘要

目的：建立小鼠腔前卵泡体外海藻酸盐包埋培养的三维培养(3-dimensions in vitro growth，3D-IVG)方法以及成熟卵母细胞体外受精体系。方法：采用机械法分离12日龄雌性昆明小鼠卵巢，获取结构完整的腔前卵泡，腔前卵泡经过包埋后体外立体化培养，激素超排，收集黏液化的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complex，COCs)，分别计数发泡期(germinal vesicle， GV)卵母细胞、生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown ，GVBD)卵母细胞和含有第一极体(first polar body，PB)卵母细胞，制备卵母细胞染色体并进行C带染色分析。同时设小鼠体内超排卵母细胞(in vivo convention，IVC)作为对照。再将体外培养成熟的卵母细胞与获能后的小鼠精子受精，观察受精情况。结果：经过3D-IVG，卵泡存活率为82.5%，卵泡发育过程维持完整的三维结构，卵泡直径增长迅速，培养6 d后，有91.7%成腔；在激素超排后，有82.6%COCs黏液化。GV、GVBD和含有PB的成熟卵母细胞分别为6.1%，45.4%和48.5%。3D-IVG获得的成熟卵母细胞百分率(48.5%)明显低于体内超排成熟卵母细胞百分率(82.9%)，差异有统计学意义(P<0.05)。但3D-IVG所获得的卵母细胞染色体C带分析表明染色体数目为20条，结构未见异常，与体内超排卵母细胞一致。并观察到3D-IVG培养成熟的卵母细胞可以受精成功。结论：建立并完善了小鼠腔前卵泡的三维体外培养体系，为生殖毒性实验研究和胚胎工程研究提供了新的方法。