改良碘化钾法提取冻存外周血基因组 DNA 的方法探讨

• 作者: 李穗雯 胡大春* 蔡雪梅
• 来源期刊: 分子诊断与治疗杂志
• 关键词: 基因组 DNA 碘化钾法 改良法 外周血
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 95-98
• 字数: 2100字
• 语种: 中文

摘要

目的探讨用改良碘化钾法(改良法)提取长期冻存外周血基因组 DNA 的方法.方法对碘化钾(KI)法加以改良,包括:血量由100μL 增加到200μL;使用0.9% NH4CL 溶液代替无菌重蒸馏水裂解红细胞;增加裂解白细胞膜的5 mol/L KI 溶液的用量(为70μL);低温(4℃)离心.然后用改良碘化钾法从82份-80℃冻存外周血标本中提取基因组 DNA.同时使用碘化钾法提取其中的30份血标本,比对两种方法提取 DNA 的浓度和纯度,并进行CYP2C19相关基因 PCR 扩增.结果两种方法所提取的 DNA 浓度和纯度分别是碘化钾法为128.2±34.9μg/mL 和 A260/A2801.74±0.08,改良法为220±91.29μg/mL 和 A260/A2801.87±0.12.改良法获得的 DNA 纯度更高,差异有统计学意义(P<0.01),通过增加样本量及对方法进行改良获得的 DNA 量较多.对改良后方法提取的基因组 DNA 进行 PCR 扩增,结果稳定.结论改良碘化钾法从长期冻存外周血中所提取的基因组 DNA 质量较高,能够满足对临床冻存样本研究的需求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡雪梅	昆明医科大附属甘美医院昆明市临床疾病分子生物学重点实验室	5	7	2.0	2.0
2	李穗雯	昆明医科大附属甘美医院昆明市临床疾病分子生物学重点实验室	2	24	2.0	2.0
3	胡大春*	昆明医科大附属甘美医院昆明市临床疾病分子生物学重点实验室	1	3	1.0	1.0