C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元体外培养与鉴定

• 作者: 堵翠 黄东雅
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: C57BL/6 胚胎 大脑皮质 神经元 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-21
• 分类号: R741
• 字数: 3732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn1008-0392.2013.02.004

摘要

目的 探讨近交系C57BL/6胎鼠皮质神经元体外培养方法,观察其生长情况,并进行鉴定.方法 分离孕17 d C57BL/6胎鼠大脑皮质,剪碎吹打,静置取上清液,余组织块以木瓜酶和DNaseI消化,差速贴壁提纯,培养6 h后以添加含谷氨酰胺和B27的Neurobasal培养基继续培养,观察其生长情况,并于体外培养3、5d时,以神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear protein,NeuN)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)为标志物,用免疫荧光双染法对分离培养的原代细胞进行鉴定.结果 体外培养6h细胞已贴壁,少量细胞发出1～3个短小突起；此后神经元相继发出突起、并伸长,与邻近细胞突起互相接触,培养5d突起已互相交织成网；体外培养3、5d的NeuN阳性细胞率分别为(94.1±5.0)％、(95.0±5.6)％；MAP-2阳性细胞率分别为(96.7±2.9)％、(95.6±5.6)％,NeuN、MAP-2阳性细胞率差异无统计学意义(P＞0.05),NeuN和MAP-2鉴定结果一致性好.结论 本方法制备的C57BL/6胎鼠皮质原代神经元纯度高,损伤小,生长发育状态良好,无明显增殖性,可作为神经元体外研究的良好实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄东雅	同济大学附属东方医院神经内科	25	111	6.0	9.0
2	堵翠	同济大学附属东方医院神经内科	8	40	4.0	6.0