18O同位素标记定量肽段串联体蛋白质结合同位素稀释-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法

• 作者: 卫军营 周廉淇 张养军 张姣 李佳斌 李楠楠 林虹君 毛心丽 田芳
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 定量肽段串联体蛋白质 同位素稀释 多反应监测质谱 18O标记 蛋白质组学
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 特别策划:定量蛋白质组学专栏
• 页码范围: 522-530
• 页数: 9页
• 分类号: O658
• 字数: 6907字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.03057

摘要

建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法.首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99％以上,相对分子质量约为63.4 kDa.对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段.还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价.实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20％,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量.更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法.