限制性内切酶介导的粉红粘帚霉67-1转化体系构建

• 作者: 姜杰 孙漫红* 李世东 许梦秋 谢响明
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 粉红粘帚霉 原生质体转化 限制性内切酶介导整合 潮霉素抗性
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 263-269
• 分类号: S476.1
• 字数: 5723字
• 语种: 中文

摘要

本文将含有潮霉素抗性基因(hph)的质粒 pAN7-1通过限制性内切酶介导法转入植病生防真菌粉红粘帚霉 Clonostachys rosea 67-1中,并由此建立该生防真菌的遗传转化体系.研究结果表明,PEG 介质含量、限制性内切酶种类和浓度、质粒形态和反应时间对转化效率具有显著的影响.当质粒经线性化后加入40% PEG3350和20 U HindⅢ,室温下转化10 min 时,转化效率可达到30~40 CFU·μg?1质粒 DNA.PDA平板上连续培养3代,再转接到潮霉素抗性平板中,获得遗传稳定的转化子.PCR 检测、Southern 杂交和Real-time PCR 检测等证明 hph 基因已整合到基因组中,且多为单拷贝插入.对随机挑取的50个转化子生长性状的测定结果表明,20%的转化子在 PDA 培养基中生长较快,12%的转化子产孢水平较高;另有16%~20%的转化子生长缓慢、产孢量减少;还有4%的转化子生长微弱,且无明显产孢现象.上述方法可以成功用于在粉红粘帚霉中引入外源基因,为今后生防粘帚霉高效工程菌株的构建提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢响明	北京林业大学生命科学学院	66	635	13.0	22.0