鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定

• 作者: 史玉颖 吴静 宋敏训 李玉峰 马秀丽 黄兵
• 来源期刊: 家禽科学
• 学科: 农学
• 关键词: 抗菌肽 β-防御素-1(Gal-1) 融合表达 分离纯化 亲和层析 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报道
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 分类号: S859.79+7
• 字数: 4540字
• 语种: 中文

摘要

防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主-家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素.鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景.通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株.筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达.SDSPAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa.对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例.表达上清用Ni2+-NTASepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带.琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性；和阳性菌均具有明显的抑制活性.Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄兵	山东省农业科学院家禽研究所	76	450	10.0	18.0
2	李玉峰	山东省农业科学院家禽研究所	53	369	10.0	17.0
3	宋敏训	山东省农业科学院家禽研究所	106	798	16.0	25.0
4	史玉颖	山东省农业科学院家禽研究所	57	99	5.0	7.0
5	吴静	山东省农业科学院家禽研究所	25	164	8.0	12.0
7	马秀丽	山东省农业科学院家禽研究所	43	483	11.0	20.0