七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析

• 作者: 刘新富 刘芝亮 史宝 徐永江 柳学周 王妍妍 陈圣毅
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 七带石斑鱼 类胰岛素生长因子-Ⅰ 成熟肽克隆 原核表达 生物活性分析
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 页码范围: 1290-1296
• 分类号: Q785|S965
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38691

摘要

应用RT-PCR方法扩增七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ(esIGF-Ⅰ)成熟肽序列.该成熟肽序列由210个碱基组成,编码70个氨基酸,包括B-C-A-D 4个结构域.将此成熟肽片段导入原核表达载体pET-28a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达.SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小为11 ku,在IPTG诱导后3h表达量最高,占菌体总蛋白的51.8％,重组蛋白主要以包涵体形式存在.对重组蛋白进行变性、纯化和复性,获得了纯化的重组蛋白.Western-blotting免疫印迹分析表明,融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别.细胞增殖实验表明,纯化的IGF-Ⅰ融合蛋白能促使人乳腺癌细胞MDA231细胞增殖,表明具有生物活性.