稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立

• 作者: 刘德武 吴珍芳 帅亮 张献伟 朱财林 袁玉娟 邹娴 黄妙容
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双筛选标记 纤维素酶 2A 猪胎儿成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 535-542
• 页数: 8页
• 分类号: S828|S814.1
• 字数: 6016字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体,筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系,为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞.采用SOE-PCR和PCR方法,分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1,构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2 A-BGL1-CMV-NEO-T2 A-EGFP,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,通过脂质体转染猪胎儿成纤维细胞,利用G418抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选,并利用PCR和Western blot进行检测.结果表明,成功构建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体,并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系.该结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础.