利用体细胞LOH突变制备α1,3-半乳糖基转移酶基因(GGTA1)缺失的五指山小型猪

• 作者: 储明星 冯冲 岳成鹤 曹随忠 李明洲 李西睿 王宁 王飞 龙川
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: α1,3-半乳糖基转移酶 自发杂合性缺失 异种器官移植 体细胞核移植 五指山小型猪
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 522-527
• 页数: 6页
• 分类号: Q812
• 字数: 4072字
• 语种: 中文

摘要

制备α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础.在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系.利用特异性结合a1,3Gal的药物GSI-B4联合免疫磁珠筛选,成功分离出自发杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的双等位基因敲除(GGTA1-/-)耳成纤维细胞.单细胞克隆培养与PCR鉴定后,以GGTA1-/-细胞为核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎并移植.先后将3 122枚重构胚移植到13头受体母猪,其中4头怀孕,产仔12头.采用PCR和Southern blotting进行GGTA1基因型检测,11头为GGTA1-/-猪；流式细胞术分析表明,GGTA1-/-仔猪耳成纤维细胞不表达a1,3Gal.获得能克服异种器官超急性排斥反应(HAR)的GGTA1-/-猪,不仅为异种器官供体的进一步基因修饰提供了平台,也为异种移植临床前研究提供了宝贵资源.