离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白

• 作者: 任皓威 刘宁 刘彪 李萌 王东茂 黄宇
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 阴离子交换色谱 质谱 β-酪蛋白 纯化 中国人乳
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 429-434
• 页数: 6页
• 分类号: O658
• 字数: 5082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.01010

摘要

以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果.从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价.结果表明:当pH =4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高.对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液.对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白；将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50％,进一步确定其为人乳β-酪蛋白.综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法.