昆虫细胞中表达eGFP基因的重组杆状病毒的构建

• 作者: 唐晓艳 平文祥 李梅 楼庄伟 葛菁萍 高冬妮
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 昆虫杆状病毒表达系统 增强型绿色荧光蛋白 昆虫细胞
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧—应用研究
• 页码范围: 26-30
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3831字
• 语种: 中文

摘要

为构建表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体.利用Sf-9细胞表达eGFP,用PCR法从重组Bacmid和pEGFP-C3质粒中扩增gp64SP、eGFP和VSVGED片段,利用一步法SOE-PCR将3个片段连接在一起.用XbaⅠ和Hind Ⅲ酶切融合片段与pFastBac PH,连接获得阳性质粒命名为pFB/LM-PH.转化E coli DH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Bv-LM-PH,感染Sf9昆虫细胞.结果表明:通过倒置荧光显微镜观察细胞形态及荧光表达情况；结果证实:感染的Sf9细胞可表达外源基因eGFP.重组pFB/LM-PH载体具备表达eGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达eGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体.