芍药肌动蛋白基因的克隆及表达分析

• 作者: 史国安 张文婷 李芳 范丙友
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 芍药 肌动蛋白 基因克隆 RT-PCR 表达分析
• 年，卷（期）: 2013,（15）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2136-2142
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.15.020

摘要

目的 克隆芍药肌动蛋白(Actin)基因并应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况.方法 根据近缘物种Actin基因的保守序列设计一对PCR扩增引物,以“桃花飞雪”芍药根部总RNA反转录而成的cDNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出芍药Actin cDNA全长并克隆至pMD 18-T载体上,阳性克隆经菌落PCR、质粒PCR及酶切鉴定后进行测序.基于测序结果设计特异性PCR引物,应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药根、茎、花、叶不同组织中的表达情况.结果 测序结果表明芍药Actin基因全长l 134 bp序列,共编码377个氨基酸,GenBank登录号为JX310002;序列分析表明芍药Actin蛋白中存在3种肌动蛋白特征信号序列,与其他植物肌动蛋白氨基酸同源性达99％；基于同源模建预测的3D结构中含有4个结构域；生物信息学软件预测芍药肌动蛋白的相对分子质量为4.17×104,等电点(pI)为5.31,是一个定位于胞液、不含跨膜域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白；半定量RT-PCR技术分析表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花组织中的表达量保持恒定.结论 首次从芍药中克隆了Actin基因,半定量RT-PCR表达分析结果表明Actin基因适合作为芍药功能基因表达分析的内标基因,为有效利用该基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史国安	河南科技大学农学院洛阳市牡丹生物学重点实验室	79	628	13.0	22.0
2	范丙友	河南科技大学农学院洛阳市牡丹生物学重点实验室	32	245	8.0	14.0
3	李芳	河南科技大学农学院洛阳市牡丹生物学重点实验室	27	68	5.0	7.0
4	张文婷	河南科技大学农学院洛阳市牡丹生物学重点实验室	5	18	2.0	4.0